Trong quá trình sử dụng kính hiển vi quang học, rất nhiều người đặt câu hỏi: Có cần đặt lamen lên lam kính không?

• Có nhất thiết phải dùng lamen?
• Không đặt lamen thì có soi được không?
• Tại sao vật kính ghi “0.17”?
• Lamen ảnh hưởng thế nào tới độ nét và độ phân giải?
• Vì sao dùng sai lamen hình ảnh lại mờ dù kính rất đắt?

Thực tế, lamen không chỉ là một miếng kính mỏng dùng để “đè mẫu vật”. Trong quang học hiển vi hiện đại, lamen là một phần của thiết kế optical system.

Đặc biệt với:

• Vật kính NA cao,
• Kính hiển vi sinh học,
• Kính hiển vi huỳnh quang,
• Kính hiển vi dầu 100x,

Việc dùng đúng lamen có thể quyết định:

• Độ sắc nét,
• Độ tương phản,
• Độ phân giải,
• Khả năng lấy nét,
• Và chất lượng hình ảnh cuối cùng.

Bài viết dưới đây sẽ phân tích chuyên sâu theo góc nhìn kỹ thuật quang học, xem cách chỉnh kính để có hình ảnh đẹp tại đây

Lamen Là Gì?

Định nghĩa lamen trong kính hiển vi

Lamen (coverslip hoặc cover glass) là tấm kính cực mỏng đặt phía trên mẫu vật trên lam kính.

Nó thường có:

• Độ dày khoảng 0.17 mm,
• Làm từ thủy tinh quang học,
• Độ truyền sáng cao.

Trong kính hiển vi sinh học, lamen giúp:

• Giữ mẫu vật phẳng,
• Bảo vệ mẫu,
• Giảm bay hơi,
• Và đặc biệt là tối ưu đường đi quang học.

Có Cần Đặt Lamen Lên Lam Kính Không?

Câu trả lời ngắn gọn

Các vật kính có độ phóng đại lớn hầu hết đều cần đặt lamen lên lam kính

Đặc biệt khi dùng:

• Vật kính 20x, 40x
• Vật kính 60x,
• Vật kính 100x oil,
• Vật kính NA cao.

Khi Nào Cần Phải Đặt Lamen lên lam kính?

Quan sát tế bào và mô học

Trong:

• Giải phẫu bệnh,
• Tế bào học,
• Sinh học,
• Vi sinh,
• Kính hiển vi huỳnh quang,

Lamen gần như bắt buộc.

Khi dùng vật kính corrected for coverslip

Rất nhiều vật kính sinh học có ký hiệu:

160/0.17
hoặc
∞/0.17

Số “0.17” nghĩa là:

Objective được thiết kế để hoạt động tối ưu truyền dẫn với lamen dày 0.17 mm.

Tại Sao Lamen Lại Quan Trọng Trong Quang Học?

Đây là phần cực kỳ quan trọng mà nhiều người chưa hiểu đúng.

Lamen Là Một Phần Của Thiết Kế Objective

Trong kính hiển vi hiện đại:

Vật kính sinh học không được thiết kế “trong không khí”.

Nó được thiết kế với giả định rằng:

• Ánh sáng sẽ đi qua:
  • Mẫu vật,
  • Chất kết dính,
  • Lớp màng dày 0,17 mm,
  • Rồi mới tới objective.

Nếu bỏ lamen:

• Optical path thay đổi,
• Tia sáng hội tụ sai vị trí,
• Xuất hiện aberration.

Sai Độ Dày Lamen Làm Giảm Độ Nét

Theo tài liệu của Nikon:

Đa số objective được tối ưu cho coverslip #1.5 tương đương 0.17 mm.

Nếu lamen:

• Quá dày,
• Quá mỏng,
• Hoặc không có,

sẽ gây:

• Quang sai cầu,
• Giảm contrast,
• Giảm resolution,
• Ảnh bị “wash out”.

Ảnh Hưởng Của Lamen Tới Độ Phân Giải

Độ phân giải phụ thuộc NA

Theo công thức Abbe:

d=0,61λ/ NA

NA càng cao:

• Khả năng phân giải càng mạnh,
• Nhưng cũng càng nhạy với sai số optical path.

Objective NA Cao Rất “Khó Tính” Với Lamen

Các objective:

• 40x NA 0.75,
• 60x NA 0.95,
• Dầu 100x NA 1,25 –1,4

Rất nhạy với:

• Độ dày lamen,
• Chỉ số khúc xạ,
• Chất liệu gắn kết.

Kính hiển vi Theo Duke:

Dùng sai độ dày coverslip có thể ảnh hưởng nghiêm trọng tới chất lượng ảnh, đặc biệt với objective NA > 0.4.

Tại Sao Không Có Lamen Ảnh Bị Mờ?

Đây là lỗi rất phổ biến.

Nhiều người nghĩ:

Bỏ lamen để objective gần mẫu hơn sẽ nét hơn.

Thực tế thường ngược lại.

Nguyên Nhân Chính: Spherical Aberration

Khi bỏ lamen:

• Tia sáng góc lớn và góc nhỏ không hội tụ cùng vị trí,
• Điểm ảnh bị “phình”,
• Contrast giảm mạnh.

Theo Cơ học Quang học:

Độ dày lớp phủ không khớp làm mở rộng chức năng trải rộng điểm và giảm độ phân giải.

Vì Sao Objective Có Ghi “0.17”?

Đây là thông số cực kỳ quan trọng trên vật kính.

Ví dụ:

• 40x/0.75 160/0.17
• 100x/1.25 Dầu ∞/0.17

Trong đó:

• 0.17 = Lamen chuẩn 0.17 mm.

Các Loại Lamen Phổ Biến

Tại Sao #1.5 Là Chuẩn Phổ Biến Nhất?

Loại No 1.5H độ dày chuẩn 0.17mm có thể đạt NA trên 0.7 (NA càng cao thì hình ảnh càng sắc nét)

Loại No 1.5 cho NA thấp hơn 0.7

Loại No 1 cho NA dưới 0.3

Vậy nên lamen độ dày càng chính xác thì cho hình ảnh càng sắc nét

Bởi vì: Phần lớn objective sinh học hiện đại được thiết kế cho coverslip 0.17 mm.

Không Dùng Lamen Có Soi Được Không?

Có, nhưng tùy trường hợp

Trường Hợp Có Thể Không Cần Lamen

Kính hiển vi kim tương

Luyện kim trong:

• Soi bề mặt kim loại,
• Không dùng ánh sáng truyền qua.

Objective loại này:

• Được thiết kế không cần coverslip.

Theo cộng đồng microscopy:

Vật kính luyện kim không hiệu chỉnh cho lam kính 0,17 mm như vật kính sinh học.

Kính hiển vi lập thể (kính soi nổi)

Kính soi nổi:

• Working distance lớn,
• Độ phóng đại thấp,
• Không cần lamen.

Quan sát vật thể dày

Ví dụ:

• Côn trùng,
• PCB,
• Mẫu cơ khí.

Tại Sao 100x Oil Đặc Biệt Quan Trọng Với Lamen?

Vật kính dầu có:

• NA rất cao,
• Góc thu sáng rất lớn.

Điều này khiến:

• Sai số optical path cực kỳ dễ thấy.

Một số loại vật kính 100x các hãng thiết kế không cần lamen ( có hoặc không vẫn tối ưu tuy nhiên đối với một số mẫu việc cho lamen lên vẫn sẽ tối ưu chất lượng hình ảnh hơn)

Hệ Oil Immersion Được Thiết Kế Đồng Bộ

Ánh sáng sẽ đi qua:

• Specimen- lam kính
• Mounting medium- keo dán lam
• tấm kính phủ
• Immersion oil- dầu soi
• Objective- vật kính

Nếu thiếu lamen:

• Optical correction sai hoàn toàn.

Có Thể Dùng Lamen Quá Dày Không?

Không nên

Lamen dày:

• Làm tăng spherical aberration,
• Giảm contrast,
• Giảm sharpness.

Theo Nikon và UQ Microscopy:

Độ lệch từ 0,17 mm sẽ làm giảm chất lượng hình ảnh đáng kể ở NA khách quan cao.

Lamen Ảnh Hưởng Thế Nào Tới Độ Sáng?

Lamen không chỉ ảnh hưởng resolution.

Nó còn ảnh hưởng:

• Quá trình lây truyền,
• Tán xạ,
• Điều chỉnh khúc xạ,
• Tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu.

Lamen Kém Chất Lượng Có Gây Mờ Ảnh Không?

Có

Lamen giá rẻ có thể:

• Độ dày không đồng đều,
• Nhiều bọt khí,
• Stress trong kính,
• Transmission kém.

Điều này gây:

• Ảnh không đều nét
• Giảm contrast.

Correction Collar Là Gì?

Một số objective cao cấp có:

Vòng chỉnh sửa Corr/ Korr

Cho phép chỉnh theo:

• Độ dày của lam kính,
• Chất liệu gắn kết.

Khi Nào Cần Corr/ Korr?

Đặc biệt hữu ích với:

• Chụp ảnh tế bào sống,
• Mẫu dày,
• Kính hiển vi confocal,
• Ống kính khô có khẩu độ số cao (High NA).

Có Nên Ép Lamen Sát Mẫu Không?

Không quá mạnh

Nếu ép quá mạnh:

• Mẫu biến dạng,
• Tế bào vỡ,
• Thickness không đồng đều.

Tại Sao Có Bọt Khí Dưới Lamen?

Nguyên nhân:

• Đặt lamen sai góc,
• Mounting medium quá ít,
• Thao tác quá nhanh.

Bọt khí gây:

• Tán xạ ánh sáng,
• Mất contrast,
• Khó focus.

Cách Đặt Lamen Đúng Chuẩn Phòng Lab

Quy trình chuẩn

Bước 1

Nhỏ mẫu hoặc mounting medium lên lam.

Bước 2

Nghiêng lamen khoảng 45°.

Bước 3

Hạ từ từ để đẩy không khí ra ngoài.

Bước 4

Loại bỏ dung dịch dư.

Có Phải Tất Cả Kính Hiển Vi Đều Cần Lamen?

Không

Điều này phụ thuộc:

• Loại objective,
• Thiết kế optical system,
• Ứng dụng microscopy.

So Sánh vật kính sinh học Và kim tương

Câu Hỏi Thường Gặp

Không dùng lamen có soi được không?

Có thể soi được ở:

• Magnification thấp, vật kính 4x 5x 10x thường không yêu cầu có lamen, có hoặc không
• NA thấp.

Nhưng chất lượng ảnh thường giảm mạnh ở objective cao.

Tại sao vật kính ghi 0.17?

Đó là:

• Độ dày coverslip tiêu chuẩn,
• Objective được tối ưu cho thông số này.

Lamen ảnh hưởng tới độ phân giải không?

Có.

Đặc biệt ở:

• NA cao,
• Objective dầu,
• Kính hiển vi huỳnh quang.

Lamen #1 và #1.5 khác nhau thế nào?

Khác chủ yếu ở:

• Độ dày,
• Khả năng tương thích với hiệu chỉnh quang học.

Lamen có ảnh hưởng tới autofocus không?

Có.

Độ dày của Sai:

• Làm focus plane thay đổi,
• Autofocus hoạt động kém chính xác.

Kết Luận

có cần đặt lamen lên lam kính không? câu trả lời là có,Lamen không chỉ là miếng kính đậy mẫu vật.

Trong kính hiển vi quang học hiện đại, nó là:

• Một phần của optical design,
• Ảnh hưởng trực tiếp tới:
  • độ phân giải,
  • độ sắc nét,
  • sự tương phản,
  • chất lượng hình ảnh.

Đặc biệt với:

• Vật kính NA cao,
• Vật kính dầu,
• Huỳnh quang,
• Kính hiển vi confocal,

Việc dùng đúng lamen 0.17 mm gần như bắt buộc để đạt hiệu suất quang học tối đa.

Nếu sử dụng sai:

• Ảnh có thể mờ,
• Giảm contrast,
• Mất chi tiết,
• Xuất hiện aberration
  Dù kính hiển vi rất đắt tiền.

Bạn đang tìm hiểu:

• Kính hiển vi quang học,
• Vật kính NA cao,
• Lamen dày 0,17 mm,
• Dầu soi,
• Hoặc tối ưu chất lượng hình ảnh microscopy?

Hãy chú ý:

• Loại coverslip,
• Độ dày lamen,
• Chỉ số khúc xạ,
• Và compatibility với objective.

Đây là yếu tố rất nhỏ nhưng có thể tạo khác biệt cực lớn về chất lượng hình ảnh trên kính hiển vi chuyên nghiệp.

Bài viết này được thực hiện bởi các Kỹ sư của Hnmicro, vui lòng không copy dưới mọi hình thức, nếu có thắc mắc về bài viết hoặc bất kỳ sản phẩm nào trên Web vui lòng liên hệ Hotline 0969.056.234